Professor Layton erhält von einer seiner ehemaligen Studentinnen, der Opernsängerin Janice Quatlane, einen Brief. Er enthält Operntickets und einen Bericht, in dem Janice erzählt, dass eine Freundin von ihr ein Jahr zuvor verstorben und nun in Gestalt eines siebenjährigen Mädchens wieder aufgetaucht sei. Das Mädchen behauptet: Ich habe das ewige Leben erlangt.
Um diesem Rätsel auf den Grund zu gehen, machen sich Professor Layton, Luke und Laytons Assistentin Remi auf die Reise, um die Oper im Crown Petone Theater zu sehen. Die Oper, eine neue Komposition des Pianisten Oswald Whistler, beruht auf Forschungsarbeiten des Mentors von Professor Layton Dr. Schrader, und behandelt die Legende des uralten Königreichs Ambrosia, dem Land des ewigen Lebens.
Der wahre Grund, aus dem die meisten der Zuschauer an diesem Abend in die Oper kommen, ist nicht die Musik, sondern das Versprechen des ewigen Lebens.
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